[Dyne 29th 기초실험방] Cell counting

Cell counting 

1. Hemocytometer 준비

1) 70% 에탄올을 이용하여 Hemocytometer를 깨끗이 닦는다.

2) Hemocytometer kit에 제공되는 Coverslip을 촉촉하게 적신 후 Hemocytometer 위에 조심스럽게 올린다. (Coverslip을 닦을 때 깨지지 않도록 유의)

2. Cell suspension 준비

1) Cell이 single cell로 잘 풀어지도록 한다.

2) Cell suspension을 serological pipette를 이용하여 1 ml 가량을 1.5 ml micro tube에 옮겨준다.

3) 100 μL 피펫을 이용하여 1.5 ml micro tube안에 있는 cell을 다시 한번 잘 풀어준 뒤 20 uL cell suspension을 새로운 1.5 ml micro tube에 옮겨준다.

4) 20 μL Trypan blue를 20 μL cell suspension과 피펫을 이용하여 충분히 섞어준다.

3. Counting

1) 10 – 20 μL의 세포현탁액을 피펫을 이용하여 Hemocytometer의 좁은 홈으로 주입한다.

http://www.hemocytometer.org/

3) 각 정사각형 안의 세포 수를 셀 때 실선으로 표시된 부분에 걸친 세포는 세지만, 점선으로 표시된 부분에 걸친 세포는 세지 않아야 한다. (이때, Trypan blue로 염색된 세포는 죽은 세포이므로 세지 말아야 함.)

4. Calculating

Cell density (ml) = Total cell count / # of square x Trypan blue dilution factor * 10⁴

예) 200 (Total cell count) / 4 (# of square) x 2 (Trypan blue dilution factor) x 10⁴ = 1 x 10⁶ cells/ml

Total cell number = Cell density * Cell suspension volume (ml)

예) 1 x 10⁶ x 20 (ml) = 2 x 10⁷ Total cells

5. 참고문헌

http://www.abcam.com/

http://www.hemocytometer.org/